Inhoud
De chemische verbindingen cetyltrimethylammoniumbromide, hexadecyltrimethylammoniumbromide, palmityltrimethylammoniumbromide en cetrimoniumbromide zijn allemaal ook bekend bij CTAB. De chemische stof wordt gebruikt als een pH-onderhouder in het DNA-sequentiële genoom, in het bijzonder de planten.
Formule CTAB
De hoeveelheden van de formules van de verschillende CTAB-chemicaliën verschillen afhankelijk van het laboratorium. Alle ingrediënten omvatten echter 1 M Tris HC1 pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl en H2O (soms tweemaal gedestilleerd). Voor de CTAB-component gebruiken sommige laboratoria cetyltrimethylammoniumbromide en andere hexadecyltrimethylammoniumbromide.
Bereiding van plantaardige weefsels
De voorbereiding van het plantenweefsel kan variëren, afhankelijk van het materiaal. Muren en celmembranen moeten worden doorbroken om toegang te krijgen tot nucleair materiaal zonder enige aantasting. Normaal gesproken biedt plantenmateriaal met vloeibare stikstof bij het malen toegang tot DNA, waardoor schadelijke cellulaire enzymen en inactieve chemicaliën worden gehouden.
Suspensie en centrifugatie
Het fijngemaakte weefsel wordt op het CTAB-blad geplaatst en in een kom met stromend water gestoken. Het wordt vervolgens gemengd met chloroform en gecentrifugeerd om de oplosbare eiwitten en andere materialen te scheiden. Het DNA wordt vervolgens uit de waterfase geprecipiteerd en zorgvuldig gewassen om de verontreinigende zouten te verwijderen. Het gezuiverde DNA wordt vervolgens teruggetrokken en opgeslagen op een TE-objectglaasje of steriel gedestilleerd water.