Inhoud
- Bacteriële agarplaten
- Agar-platen vullen
- Agarplaten bewaren
- Omkeren van agarplaten tijdens opslag
- Omkeren van agarplaten tijdens inenting en incubatie
Agarplaten worden door wetenschappers in de cel- en moleculaire biologie gebruikt om onderzoeksexperimenten uit te voeren. Het zijn plastic petrischalen gevuld met agar gemengd met voedingsstoffen die de groei van verschillende micro-organismen, zoals E. coli-bacteriën, mogelijk maken. Ze worden beschouwd als een gebruikelijk verbruiksmateriaal in laboratoria, omdat ze snel worden gebruikt en meestal intern worden aangebracht, in grote series en vervolgens worden opgeslagen.
Bacteriële agarplaten
Deze plaques worden in het algemeen geproduceerd door wetenschappelijke technici die agar van laboratoriumkwaliteit opnemen in een bacterieel kweekmedium, zoals Luria-Bertani, SOC, Terrific of methyleenblauw eosine. De bereiding van het agar kweekmedium wordt aangevuld door andere factoren die nodig kunnen zijn voor de bacteriën om te overleven of een specifiek antibioticum (bijvoorbeeld ampicilline of kanamycine) om de groei van ongewenste bacteriën te voorkomen.
Agar-platen vullen
Agarplaten worden bereid door eenvoudig de combinatie van voedingsstoffen en agar te mengen met een gebalanceerde pH-zoutoplossing en deze te verwarmen tot ze smelten. Nadat het enigszins is afgekoeld, worden hittegevoelige supplementen toegevoegd. Dit mengsel wordt gegoten terwijl het nog steeds warm (en daarom vloeibaar) is op de bodem van elke petrischaal; het wordt toegestaan te drogen en vast te worden op een oppervlak waarop bacteriesuspensies kunnen worden geplaatst. Nadat de platen volledig zijn afgekoeld, worden ze gelabeld en opgeslagen tot gebruik. Een goede opslag van agarplaten is belangrijk om ervoor te zorgen dat de juiste bacteriën worden gekweekt en dat er geen ongewenste contaminatie optreedt, die de experimentele resultaten kan verstoren.
Agarplaten bewaren
Er zijn verschillende manieren om agarplaten op te slaan, afhankelijk van welke supplementen ze bevatten. Als er lichte supplementen beschikbaar zijn, worden de platen in het donker bewaard, in folie gewikkeld of bewaard in een lichtdichte houder. De platen worden altijd bewaard in een koelkast of laboratorium koelkast bij 4 graden Celsius, of 39,2 graden Fahrenheit. Koude opslag kan de groei van ongewenste biologische verontreinigingen voorkomen of minimaliseren.
Omkeren van agarplaten tijdens opslag
Ongebruikte platen worden altijd omgekeerd of ondersteboven over hun deksels geplaatst tijdens opslag. Dit wordt gedaan om te voorkomen dat verdamping optreedt als de plaque gedurende lange perioden wordt bewaard, wat de groei-efficiëntie van de bacteriën kan beïnvloeden, of de vermenigvuldiging van ongewenste organismen zoals schimmels mogelijk maken.
Omkeren van agarplaten tijdens inenting en incubatie
Zodra de plaques zijn gevuld met een vochtige suspensie van bacteriën, moet het worden toegestaan om iets te verdampen vóór incubatie gedurende de nacht. Er zal echter nog steeds een matige hoeveelheid vocht aanwezig zijn. Als de plaque niet wordt geïnverteerd tijdens incubatie, zullen de bacteriën zich niet goed aan de agar kunnen hechten, wat ofwel zal voorkomen dat ze groeien en koloniën op een geschikte manier vormen of de groei van ongewenste micro-organismen stimuleren. Elk van deze resultaten maakt het experiment ongeldig. Bovendien kan condensatie of vocht scoren veroorzaken, waardoor het erg moeilijk wordt om afzonderlijke kolonies te selecteren en analyseren. Zodra de bacteriën koloniën vormen, wordt de plaque ook ondersteboven bewaard om het vochtgehalte te handhaven.